类器官厚样本成像，徕卡共聚焦系统解决方案第一弹-医疗器械网

类器官厚样本成像，徕卡共聚焦系统解决方案第一弹

来源：徕卡显微系统(上海)贸易有限公司分类：应用方案 2024-03-28 19:15:07 11阅读次数

自21世纪初，随着干细胞研究和组织工程的重大突破，类器官及其在显微成像中的应用取得了显著进展。已开发的多种类器官模型，如大脑、肝脏和肠道类器官，为研究器官发育、疾病机制揭示及治疗评估提供了新途径。同时，类器官成像技术的发展极大地促进了研究人员对这些复杂三维结构以细节和动态模式进行观察的能力。尽管如此，类器官研究仍面临多个挑战，包括维持样本活性、确保成像深度与分辨率，及处理和分析大量数据的需求。^[1][2]

视频1.肺腺癌类器官样本，共聚焦四色成像，40x 甘油镜，拍摄厚度71微米（144层），样本来源伯桢生物bioGenous

DAPI-细胞核，CK7-细胞质，F-ACTIN-细胞膜，TTF1-细胞核（强增值性细胞）

共聚焦显微镜物镜的发展，特别是用于观察厚样本的物镜，对匹配样本和周围介质的折射率至关重要，否则会影响成像深度。高数值孔径的油浸物镜虽然提供高分辨率，但当用于水样本时由于折射率不匹配而面临限制，导致球面像差。这影响了能够有效成像的样本深度，并降低了图像质量。

图1.折射率

为了解决这些挑战，研究人员开始使用甘油作为一种折射率接近生物样本的介质，将样本置于甘油中，并使用甘油物镜进行成像。随着技术的进步，甘油物镜的设计和性能不断改进，成为现代显微镜中常见的物镜类型之一。

表1. 常见封片剂类型及其介质折射率的表格

封片剂类型	介质折射率	应用
水基封片剂	约1.33	水溶性样本，如染色后的细胞和组织切片
硅油	约1.40-1.41	活细胞成像和深度成像
VECTASHIELD, ProLong/ProLong Gold	约1.44-1.46	抗淬灭封片剂，长时间保持荧光稳定性和减少光淬灭影响
Fluoromount-G^TM	约1.45-1.47	常用的永久性封片剂
Mowiol 或PVA	约1.41-1.49	用于荧光标记样本，提供良好的折射率匹配和稳定性
BABB, FocusClear, DBE	约1.45-1.56	用于透明化样本的成像