干货分享 | 细胞冻存及复苏避坑指南!
细胞培养是生命科学实验中离不开的实验之一,它有广泛的应用。细胞培养可以用于研究细胞的信号转导、合成代谢、生长增殖等。细胞培养的常见实验包括细胞复苏、细胞传代和细胞冻存等,其中细胞冻存及复苏的过程对于细胞生长状态有重要影响。
局部电解质浓度改变,pH值改变,部分蛋白质变性;
细胞内冰晶形成,可引起溶酶体的损伤使溶解酶释放,造成细胞内结构成分的破坏、线粒体肿胀、功能丧失并造成细胞能量代谢障碍;
细胞膜上的类脂蛋白复合体在冷冻中易发生破坏引起膜通透性改变,使细胞内容物丧失;
细胞核在冷冻保存时也易受损。
为了降低在细胞冻存时对细胞的损伤,可以在冻存时加入冻存保护剂甘油或二甲基亚砜(DMSO)(SKU:02196055)以降低对细胞损伤或死亡。DMSO作为渗透性细胞保护剂,其能够迅速穿透细胞膜进入细胞中,防止细胞内液冰晶的形成,以及防止细胞结构紊乱等。
二甲基亚砜(DMSO)结构式
研究表明,不同浓度的DMSO对细胞活力均有影响,DMSO浓度不超过10%时,对细胞的活力影响较小(如图1)。除此之外,DMSO浓度为10%时,抑菌效果能够接近100%。在DMSO中加入适宜浓度的血清,有助于解冻后提高细胞收获率和其功能活性的恢复。因此,细胞冻存时常常使用10%浓度的DMSO,可以在其中加入胎牛血清等作为保护剂,血清有助于解冻后细胞功能活性的恢复(如图2为细胞冻存流程图)。
图1. DMSO浓度与细胞活力[1]
图2. 细胞冻存操作流程图
细胞复苏是指将冻存在液氮或低温冰箱中的细胞解冻后重新培养,使其恢复生长的过程。细胞复苏过程中,需要遵循快速融化的原则,这样可以保证细胞外结晶短时间内融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内再形成冰晶对细胞造成损伤。细胞复苏后1-2天,细胞活性会逐渐得到恢复(如图3为复苏HEK293T细胞数对数值)。
细胞复苏的主要实验过程如下:
步骤1:从液氮容器或低温冰箱中取出冻存管,迅速将其浸入37℃的温水中,并不时摇动以使其尽快融化。37℃水浴时间尽可能短(1-2min),因为延长时间会增加细胞死亡率;
步骤2:当细胞完全融化后,从水浴中取出冻存管,用酒精棉球消毒外部,然后开启瓶盖;
步骤3:将细胞悬液转移到离心管中,加入适量的培养液,并进行离心,以去除DMSO和死细胞;
步骤4:离心后,弃去上清液,用新的培养液重悬细胞,并计数,调整细胞密度;
步骤5:将细胞接种到培养瓶中, 37℃静置培养。在培养初期,应注意观察细胞状态,以确保其正常生长。
图3. HEK-293T细胞生长曲线(复苏后)[2]
图4. 细胞复苏操作流程图
细胞冻存及复苏是细胞培养常见的实验方法,选择合适的方法以及合理的操作能够保证细胞的活性。除此之外,选择合适的冻存保护剂也是该实验中较为关键的一步,例如DMSO应当选择内毒素水平低、细胞培养级的产品,能够降低对细胞的损伤。
点击此处可申请试用~
参考文献:
[1] Addison CJ, Chu SH, Reusch RN. Polyhydroxybutyrate-enhanced transformation of log-phase Escherichia coli. Biotechniques. 2004 Sep;37(3):376-8, 380, 382. doi: 10.2144/04373ST01. PMID: 15470891.
[2] 杨彪,梅晰凡,刘福强.HEK-293细胞复苏培养及冻存[J].辽宁医学院学报,2007,(06):1-3.
往期回顾
◆ 【大奖】试用反馈及文献征集奖励活动!
◆ 【攻略】DNA提取秘籍在手,实验路上不用愁!
◆ 【高分文献】肠道共生狄氏副拟杆菌或可减轻炎症性关节炎?
全部评论(0条)
推荐阅读
-
- 干货分享 | 细胞冻存及复苏避坑指南!
- 干货分享!
-
- 【聚焦激光】滤光片在流式细胞仪中的应用!
- 应用方向:流式细胞仪;滤光片
-
- 【应用推荐】如何在3D培养的细胞中,对多个基因进行高通量定量分析?
- 【应用推荐】如何在3D培养的细胞中,对多个基因进行高通量定量分析?
-
- 细胞计数仪知识分享系列 | 性能检测篇
- 细胞计数仪知识分享系列 | 性能检测篇
-
- 免疫洞察力 | 流式细胞术免疫细胞精细化分型在体检中的应用
- 免疫洞察力 | 流式细胞术免疫细胞精细化分型在体检中的应用
-
- 连发3篇hiPSC文章,单细胞可视化培养系统颠覆传统,分离效率高达100%!
- 连发3篇hiPSC文章,单细胞可视化培养系统颠覆传统,分离效率高达100%!
-
- CAR-NK细胞治疗的新赛道:自身免疫疾病
- 文末扫码下载Cytiva细胞治疗整体解决方案
-
- 创新2024|CEPT技术革新,Gibco CultureCEPT添加剂重塑细胞存活新高度
- 创新2024|CEPT技术革新,Gibco? CultureCEPT?添加剂重塑细胞存活新高度
-
- 创新2024 | 赛默飞携手创新之力,干细胞或成拯救濒危物种的破冰之匙
- 文末扫码,获取更多干细胞资料
-
- 一种创新的三维细胞图像形态学评价系统
- 一种创新的三维细胞图像形态学评价系统
①本文由医疗器械网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表医疗器械网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。
②凡本网注明"来源:医疗器械网"的所有作品,版权均属于医疗器械网,转载时须经本网同意,并请注明医疗器械网(www.120med.com)。
③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。
④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi
参与评论
登录后参与评论