为度流式绝对计数微球,单平台绝对计数优选方案
细胞绝对计数在生物学和医学研究领域具有广泛的应用。通过细胞计数方法获得细胞悬液浓度是各类基础研究中细胞实验的第一步。临床诊断中,CD4+T淋巴细胞数目每微升小于200个是艾滋病诊断的金标准;CD34+ 细胞的绝对计数成为骨髓动员和外周血造血干细胞移植的重要指标。[1,2]
细胞绝对计数方法
表1.绝对计数方法对比
细胞绝对计数指单位体积样本中(如血液样本),含有某种类别细胞的数目(个/μL)。传统的细胞绝对计数方法是血细胞计数板法,其计数结果不稳定,耗时耗力。后来,不同工作原理的全自动细胞计数仪问世,使绝对计数效率和准确性有了显著提高。随着流式细胞术的快速发展,细胞绝对计数方法得到优化,相继出现了流式细胞仪双平台法和单平台法。
淋巴细胞亚群绝对计数
血液肿瘤是一类具有较高发病率和致死率的恶性肿瘤,疾病的多种因素会使外周血的淋巴细胞数量与功能产生异常,导致免疫功能失调。淋巴细胞亚群检测作为一种重要的辅助手段,广泛用于血液肿瘤患者的免疫状态评估、疾病复发或转移风险预测及治疗指导等。最新发布的《淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识》详细介绍了淋巴细胞亚群的检测方法、检验的质量控制、报告的解读方法并归纳总结了淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中的重要临床意义。共识中明确指出,流式细胞术是检测淋巴细胞亚群的主要方法,可以采用双平台法或单平台法。[3]
为度流式绝对计数微球
在绝对计数的方法中,单平台微球法是当前相对公认的、较为稳定可靠的一种方法。可提供适用于单平台绝对计数的流式绝对计数微球,可有效保证计数结果可靠性。流式绝对计数微球包括非荧光系列(FC)和荧光系列(FM),荧光系列为包埋荧光染料的羧基聚苯乙烯微球,内部荧光染料有多种组合(FITC,PE,APC)可供选择,适用于引入后续标记后的不同细胞类别分类和绝对计数。
我们将VDO荧光系列(FM)微球和竞品N微球进行对比测试,测试报告如下:
01
实验目的
使用流式细胞仪对VDO流式绝对计数微球进行测试,并与竞品N微球做对比评估。
02
实验方案
2.1 实验材料
2.2 操作流程
将待测流式微球充分混匀,用纯水稀释后(建议终浓度为10^5–10^6个/mL),使用流式细胞仪进行检测。
03
实验结果
3.1 VDO绝对计数微球流式结果图
3.2 竞品N绝对计数微球流式结果图
3.3 数据统计
04
结果分析
4.1 VDO流式绝对计数微球FSC CV略高于竞品N微球,但差异不大。
4.2 VDO流式绝对计数微球FITC/PE/APC荧光通道CV均优于竞品N微球。
05
总结
VDO流式绝对计数微球粒径和荧光强度高度均一,有助于提升计数准确性,是单平台绝对计数的优选方案。
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参考文献
References
[1] Nasi M, De Biasi S, Bianchini E, et al. Reliable and accurate CD4+ T cell count and percent by the portable flow cytometer CyFlow MiniPOC and "CD4 Easy Count Kit-Dry", as revealed by the comparison with the gold standard dual platform technology. PLoS One. 2015 Jan 26;10(1): e0116848.
[2] Pedrosa de Lira de Morais CC, Dias Alves Pinto J, Wagner de Souza K, et al. Validation of the single-platform ISHAGE protocol for enumeration of CD34+ hematopoietic stem cells in umbilical cord blood in a Brazilian center. Hematol Transfus Cell Ther. 2022 Jan-Mar;44(1):49-55.
[3] 陈双,程沈菊,蒋亭亭,李轶勋,刘耀,彭余,武坤,杨再林.淋巴细胞亚群检测在血液肿瘤中应用的专家共识[J].国际检验医学杂志:1-15.
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