国际首个外泌体鼻喷临床试验治疗阿尔茨海默病-医疗器械网

国际首个外泌体鼻喷临床试验治疗阿尔茨海默病

来源：贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司分类：动态 2023-11-20 10:10:51 0阅读次数

经鼻给药后，EVs快速有效地进入大脑，主要积聚在中枢神经系统内的神经元中，有效地改善 APP/PS1转基因小鼠全脑区神经损伤，新生神经元显著增加，记忆缺陷得到有力修复¹。

阿尔茨海默病（Alzheimer's disease，AD）是最常见的神经退行性疾病，也是痴呆最常见的病因，目前尚无有效的治愈手段，使之成为威胁老年人生活质量的重大健康杀手。外泌体是细胞在静息或应激状态下释放的细胞外囊泡，富含脂质、蛋白质和核酸。它们可以通过体液递送到远处区域，并通过3种途径被靶细胞吸收：膜融合、内吞和配体-受体介导的机制。近年来，外泌体被发现在AD中具有重要作用，为AD诊断或治疗提供了新的可能。间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）来源的外泌体与MSCs相比具有以下优势：免疫原性低、易获得性（可从市售细胞系批量合成）、在收集或分化时无需侵入性操作、以及储存简便，使之应用于临床成为可能。先前的研究表明在小鼠模型中，来自健康志愿者的人脂肪衍生的间充质干细胞外泌体（allogenic human adipose-derived MSCs Exosomes，ahaMSC-Exos）鼻内给药可改善AD病理及空间记忆¹。但是目前仍缺少相关的临床实验结果验证其在AD治疗中的安全性和有效性。

为了明确ahaMSC-Exos的临床应用价值，上海交大医学院附属瑞金医院王刚教授团队开展了国际首个单中心、开放标签外泌体喷鼻治疗AD临床试验（Clinical Trial NCT04388982），验证其在AD患者中通过鼻内给药的安全性和有效性。近日，相关研究成果以“Clinical safety and efficacy of allogenic human adipose mesenchymal stromal cells-derived exosomes in patients with mild to moderate Alzheimer's disease: A phase I/II clinical trial”为题，发表于General Psychiatry。

临床试验设计方案

健康志愿者来源的脂肪细胞通过体外培养制备ahaMSC，并使用聚合物沉淀与超速离心分离相结合的优化工艺进行ahaMSC-Exos的分离纯化²，相关实验在符合cGMP的实验室完成。外泌体制备由试验分为三个剂量组：低剂量组（2×10^8），中剂量组（4×10^8），高剂量组（8×10^8），采用“3+3”试验设计，筛选合格的受试者依次分配至不同剂量组，每周2次鼻内给药，干预期为期12周，治疗结束的随访包含第16，24，36和48周。

从基线到第12周的分数变化情况

研究发现所有受试者，未报告不良事件，安全性评估指标（包含生化检验等）无明显异常。与基线相比，中等剂量组受试者ADAS-cog评分在第12周下降了2.33（1.19），MoCA-B评分增加了2.38（0.58），表明认知功能有所改善。此外，中等剂量组受试者ADAS-cog评分至第36周持续下降3.98分。特异示踪剂标记的PET-MRI显示三个剂量组间淀粉样蛋白或tau沉积改变无显著差异，但中剂量组海马萎缩程度较轻。该临床试验证明了ahaMSC-Exos的安全性，所有受试者可耐受一周两次的鼻内给药，同时为进一步临床试验提供了剂量选择和参考依据。

Tips: cGMP级别外泌体纯化策略²：

将 haMSC 培养至第 4 代，播种密度在 1-1.5×10 ⁴/厘米。当细胞达到 90% 汇合度时，将完全培养基改为条件培养基（无 EV 培养基, 将完全培养基以 120,000 g 离心 6 小时以去除 EV，取上清液作为无EV培养基）。我们使用条件培养基孵育细胞以收获 EV，并且不使用血清饥饿处理。孵育48 h后，用差速离心法去除上清液中的细胞碎片，与12%聚乙二醇（PEG）孵育24 h，并在4°C下以3000 g离心1 h。将沉淀物用PBS重悬，并以 120,000 g离心70分钟以去除游离蛋白和杂质。haMSC-EVs最终用生理盐水溶解。作者建立了一个完整系统，以确保每个生产步骤都符合GMP标准，包括设施认证、人员培训、材料控制、环境监控和相关文件记录管理。关键工艺步骤的关键质量控制点（CQCP）如图所示。每个CQCP的测试列于下表中。