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建议收藏丨SIP-Raman技术实验方法指南

来源：长春长光辰英生物科学仪器有限公司分类：选购指南 2024-04-28 09:45:04 11阅读次数

在微生物研究领域，准确追踪和分析微生物的代谢活动对于理解其在生态系统中的角色至关重要。

应用团队凭借其丰富的实验开发经验，成功整理并优化了多个SIP-Raman技术的实验方法。这些方法可适用不同的应用场景，希望这些方法能够为广大研究者提供实际帮助，共同促进科学界对微生物世界的理解。

D₂O-Raman 实验方法

1. 将D₂O按一定比例（终浓度30%-50%）添加至可培养细菌的培养基中。

2. 接种可培养菌至培养基中，按培养菌生长代谢周期培养标记，预估细菌生长代谢周期3h-7天不等。

3. 如细菌本身不可培养，可以在原环境中离心去除原有水，再添加水与D₂O的混合溶液使得D₂O终浓度同上。

4. 提取培养环境中的细菌群落，经过ddH₂O清洗后，点样至HOOKE拉曼分选芯片，风干后进行拉曼检测和D₂O标记菌分选。

¹³C、¹⁵N-Raman 实验方法

1.合成¹³C标记的碳源（例如¹³C-甲苯、¹³C-苯丙氨酸、¹³C-碳酸氢盐等）和¹⁵N标记的氮源（例如¹⁵NH₄Cl、¹⁵NO₃ -、¹⁵N₂等）。

2. 在原有培养基中按一定比例替换其中的碳源或氮源，确保¹³C或¹⁵N底物的占比不会过低，尽量保证碳源/氮源唯一。

3.将细菌接种/转移至上述培养基中，不可培养菌可向类环境培养基中添加同位素底物来标记代谢活性菌。

4.提取环境/培养基细菌，经清洗后滴加至HOOKE拉曼分选芯片上，风干固定后置于PRECI SCS-R300上进行拉曼检测和LIFT分选。

一实验小贴士一

在需要探究环境菌群对某种底物/某种环境下的代谢活性时，由于细菌群落生长所需的营养条件不统一，而无法使用同位素标记底物，此时可以替换原环境中的H₂O为D₂O，用D₂O的代谢量表示细菌对该底物/在该环境下的代谢活性。

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