iPSC工作流程鉴定,Cells-to-CT让核酸水平检测更快速、更简单
2012年诺贝尔生理学或医学奖得主山中伸弥于2006年首次实现了将体细胞重编程为具有人胚干细胞特性的多能性细胞,即诱导多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cells, iPSC)。iPSC具有多向分化和强大自我复制潜能,在疾病研究、药物筛选、细胞治疗、再生医学等领域具有广阔的应用前景。
图1. 将体细胞重编程为iPSC。
Takahashi & Yamanaka (2006). Cell 126:663 – 676.
iPSC 工作流程
iPSC 经典工作流程包括:体细胞获得、重编程、培养、改造、分化及分析和检测。在重编程、改造、分化步骤都需要进行核酸水平、蛋白水平、细胞水平的鉴定。
图2. iPSC经典工作流程。
iPSC重编程
不同的重编程方法可以按照是否会整合到细胞基因组,而归类为整合、可移除、非整合三种。非整合重编程技术,即使用小分子或蛋白质将重编程因子传递到细胞中,不涉及将基因插入宿主细胞的DNA,虽然相对来说效率较低,但更为安全。
图3. 不同重编程技术的安全性和效率。在每一类中,各种技术按照其效率从高到低排列。
核酸水平快速鉴定
在iPSC工作流程中,可使用Invitogen TaqMan? Cells-to-CT? Express 试剂盒进行核酸水平快速鉴定,包括仙台病毒的残留检测以及基因表达的分析。无需RNA纯化,从培养的干细胞样品直接进行RT-qPCR,和传统TRIzol提取RNA、反转录、PCR的流程相比,能获得一致的结果,但更加快速简便。
图4. 某客户SeV清除实验。使用TaqMan Cells-to-CT Express 试剂盒对不同代次 iPSC 克隆进行 SeV 基因检测,RT-qPCR结果显示P15代相较于P9、P10和P11代,仙台病毒残留明显减少。根据几次实验结果推测在第15-16代,仙台病毒彻底清除。
Invitrogen? TaqMan? Cells-to-CT? Express试剂盒
简单快速—5分钟内完成96个样品制备用于RT-qPCR
无需RNA纯化—无需加热、离心,可直接在培养板中裂解样品
性能出众—可以从10到105个细胞中获得一致的准确性、可重复性和灵敏度
经过验证—兼容20多种细胞系,预先优化的全套试剂盒
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