呼吸道传染病核酸检测及耐药性检测方案
今年冬天,新冠复阳、流感、支原体肺炎等呼吸道疾病接力,不少孩子纷纷中招肺炎支原体感染,出现发烧咳嗽的症状,甚至一家人都被感染。
为什么今年支原体肺炎特别厉害?
一方面,新冠感染后,新冠病毒会对人体免疫系统造成一定程度的损伤,导致免疫力下降。另一方面,支原体肺炎通常3到7年会发生一次地区性流行,今年正是支原体的流行大年。
什么是肺炎支原体?
肺炎支原体 (MP) 是一种大小介于细胞和病毒之间的原核致病微生物,常规无菌过滤不能除掉支原体。支原体没有细胞壁,通过破坏细胞壁来杀死细菌的抗生素 (比如青霉素、头孢) 对支原体无效。
图1. 支原体的结构。图片来源: Designua / Shutterstock
核酸检测:多种病原体感染早期检测
根据《儿童肺炎支原体肺炎诊疗指南 (2023年版)》,符合临床和影像学表现,结合以下任何一项或两项,即可诊断为肺炎支原体肺炎:
抗体检测:单份血清 MP 抗体滴度≥1:160 (PA 法);病程中双份血清 MP 抗体滴度上升4倍及以上。
核酸检测:MP-DNA 或 RNA 阳性。
核酸检测,大家都很熟悉,相比抗体检测具有灵敏度和特异性更高的特点,适用于多种病原体感染的早期诊断。MP 核酸检测方法,包括荧光定量 PCR、环介导等温扩增技术 (LAMP)、实时荧光等温扩增检测技术 (SAT)。
多位专家认为,今年新冠疫情后人群免疫力下降,肺炎支原体、细菌和病毒等病原体混合感染变得多发。在感染早期,采用鼻咽拭子核酸检测,能够一次性查出多种常见病原体感染情况,确定是否存在混合感染,有利于及时诊断和用药。
肺炎支原体耐药性形势严峻
治疗肺炎支原体肺炎常用抗菌药物包括大环内酯类、氟喹诺酮类、四环素类,其中大环内酯类药物是首选治疗药物,比如阿奇霉素、克拉霉素,其他两类都有副作用。但在中国,有报道住院儿童MP对大环内酯类抗生素耐药率>80%,有的耐药率高达90%-100%。
图2:按国家分类的耐大环内酯类肺炎支原体感染比例图,来自 JAMA Network 官网
肺炎支原体耐药性会延长症状持续时间和治疗时间,增加经济支出,甚至增加并发症和后遗症的发生风险。
肺炎支原体耐药检测方法
《儿童肺炎支原体肺炎诊疗指南 (2023年版)》中指出,MP对大环内酯类抗菌药物耐药机制主要为23S rRNA 基因2063、2064或2617位点等碱基突变,其中2063或2064位点突变可导致高水平耐药。临床上可以通过测定上述位点突变判断耐药与否。
荧光定量PCR是检测单碱基突变的常用方法,提取鼻咽拭子、痰液等样品核酸,对靶位点进行扩增,具有特异性强、准确、快速等优点。此外,也可以对靶位点PCR扩增后进行DNA测序。
肺炎支原体核酸检测及耐药性检测方案
采用荧光定量PCR技术,可以一步检测,同时解决两大问题,明确病原体的同时确定是否耐药,即时给出用药指导。
图3. 肺炎支原体核酸检测及耐药性检测方案。
核酸提取是核酸检测的关键步骤之一,PCR/qPCR 的灵敏度与生物样品中核酸的回收率呈正相关,同时也是核酸检测的限速步骤之一。
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