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热点应用丨双光子成像——RMS1000共聚焦显微拉曼光谱仪新功能拓展

来源:天美仪拓实验室设备(上海)有限公司      分类:产品评测 2024-02-07 09:45:08 15阅读次数



双光子成像



双光子显微是一种成像技术,其中两个红外光子被同时吸收以产生更短波长的荧光。双光子吸收是一个非线性过程,其吸收概率与激发强度成二次方关系。这导致荧光被限制在比单光子荧光显微镜小得多的焦点,因为焦点是空间中唯一具有足够光子密度以发生双光子吸收的点。这种局部激发与较长波长红外激发光的较低吸收和散射相结合,使双光子显微镜成为深入厚生物样品成像的理想选择。

图1 单光子 vs 双光子激发



实验配置



双光子吸收需要非常高的激发强度,这只能通过飞秒激光器来实现。爱丁堡仪器 RMS1000 共聚焦拉曼显微镜具有外部激光耦合端口,可将飞秒激光耦合到显微镜中。下面显示了使用 RMS1000 进行双光子光谱和寿命显微镜的实验设置,其中 RMS1000 已配置有 CCD 相机和光子计数的光电探测器以及时间相关单光子计数 (TCSPC) 电子设备,用于光谱和寿命双光子显微成像中。

图2 双光子显微镜的光学设置示例。RMS1000 配备用于荧光光谱采集的 BI-CCD 相机和用于荧光寿命采集的光电探测器和 TCSPC 寿命电子设备。激发光源是 Chromacity 1040 HP 飞秒光纤激光器,工作频率为 80 MHz(Chromacity Ltd.,UK)。



RMS1000双光子成像案例



 肾组织切片 

图3 小鼠肾脏切片的双光子光谱强度 (a) 和寿命 (b) 成像 

 肠道组织切片 

图4 使用 Alexa Fluor? 568 染色的小鼠肠道切片的双光子光谱强度(a) 和寿命 (b) 成像

 铃兰草根茎 

图5 用吖啶橙染色的铃兰草根茎的双光子光谱强度 (a) 和寿命 (b) 成像。



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最近更新:2023-09-18 16:20:36
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