热点应用丨双光子成像——RMS1000共聚焦显微拉曼光谱仪新功能拓展
双光子成像
双光子显微是一种成像技术,其中两个红外光子被同时吸收以产生更短波长的荧光。双光子吸收是一个非线性过程,其吸收概率与激发强度成二次方关系。这导致荧光被限制在比单光子荧光显微镜小得多的焦点,因为焦点是空间中唯一具有足够光子密度以发生双光子吸收的点。这种局部激发与较长波长红外激发光的较低吸收和散射相结合,使双光子显微镜成为深入厚生物样品成像的理想选择。
实验配置
双光子吸收需要非常高的激发强度,这只能通过飞秒激光器来实现。爱丁堡仪器 RMS1000 共聚焦拉曼显微镜具有外部激光耦合端口,可将飞秒激光耦合到显微镜中。下面显示了使用 RMS1000 进行双光子光谱和寿命显微镜的实验设置,其中 RMS1000 已配置有 CCD 相机和光子计数的光电探测器以及时间相关单光子计数 (TCSPC) 电子设备,用于光谱和寿命双光子显微成像中。
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