医疗器械网(120med.com)欢迎您!

| 登录 注册
网站首页-资讯-专题- 微头条-话题-产品库- 品牌库-搜索-供应商- 展会-招标-采购- 社区-知识-技术-资料库-直播- 视频-课程

技术中心

当前位置:医疗器械网> 技术中心>适用于膜片钳系统的细胞培养小妙招

适用于膜片钳系统的细胞培养小妙招

来源:丹麦索菲恩生物科技有限公司上海代表处      分类:维修保养 2024-04-02 15:15:04 82阅读次数






       细胞状态的好坏对实验结果有着直接影响,而这一点对于膜片钳实验显得尤为突出。膜片钳实验在封接、破膜过程中,对细胞膜表面的状态有着较高的要求,因此有时膜片钳实验的成功与否可以直接认为是成也细胞状态,败也细胞状态。细胞培养技术作为生命科学实验技术的基础,实验操作本身并没有多么复杂的流程和难点,但是为什么好多实验人员还会为细胞状态不好而烦恼呢?其实,除了细胞系本身的一些培养特点以外,细胞培养过程中的一些操作流程也有着很多的注意事项和小技巧。

       Sophion为提高QPatch和Qube膜片钳系统的实验成功率,在细胞培养方面做了一系列的优化,而这些小技巧同样适用于手动膜片钳系统细胞的培养。本文从细胞复苏、传代、消化、冻存以及其他操作过程中一些需要注意的微小细节出发,介绍了如何提升细胞培养状态,帮助提高膜片钳实验的成功率。


细胞复苏和培养

       在复苏新的细胞株时,我们推荐在开始时先将冻存管中的细胞转移到T75培养瓶进行培养。当然,如果已知复苏的细胞株是生长缓慢的细胞时,也可以使用T25培养瓶。需要注意的是,在这一过程中一定要尽可能快的解冻细胞,一般是在37°C 水浴锅中进行,严格遵循慢冻快融的原则。在复苏过程中要做好无菌操作,尽可能避免触碰冻存管盖子接口,避免造成污染。在细胞长到80%时进行传代。


细胞的消化

       细胞消化对制备膜片钳细胞样本而言尤为重要。消化不到位,细胞容易成团,无法制备出好的单细胞悬浮液,而消化太过,则会导致细胞膜表面的结构被破坏,这会严重影响后续细胞的封接、破膜。在细胞消化时,我们推荐在细胞生长到80%时,使用无镁钙离子的PBS冲洗两次,然后加入消化酶,在培养瓶中加入的消化酶量最好把细胞层完全覆盖稍有多余,不宜在培养瓶中加入太多的消化酶,避免过度消化。加入消化酶后,最好在37°C培养箱中进行消化,要随时关注细胞的消化状态,终止消化时要加入足够的完全培养液,防止过度消化。

          我们推荐的消化酶有:
          ? 10XTrypsin
          ? Detachin?
          ? Accutase?
          ? TrypLE

       消化酶的使用并不是唯一固定的,根据细胞的生长特性,每种细胞都有其更加适合的消化酶。例如,Trypsin的消化作用更强,消化速度更快,对一些细胞膜强壮且贴壁生长较紧密的细胞系消化效果非常好;Detachin消化作用较为柔和,消化速度较慢,且不容易破坏细胞膜表面,对一些比较娇弱的细胞很友好。消化酶的选择在实验过程中十分重要的,更多细节的描述可以从下文的应用报告中获得。


培养箱

       培养箱的管理是细胞培养过程中很容易被忽略的一环。温度的稳定性是维持细胞稳定生长的关键。很多实验室的细胞培养箱是公共使用的,操作人员众多导致细胞培养箱门频繁开关,这使得培养箱的内部环境一直在发生变化,细胞生长的状态受到了严重的影响。除此之外,频繁的与外界环境接触也容易导致细胞的污染。因此,我们建议有条件的实验室,把实验用细胞和传代保种细胞分开进行培养,保持培养箱的洁净,减少外界环境对细胞的影响。


细胞冻存

       大部分的细胞在培养一定的时间段后,会丧失它的一些表达特征,因此我们要对细胞即时进行冻存。细胞在冻存时一定要按该细胞冻存指南配置合适无菌的冻存液,其细胞的密度,体积都应当注意,细胞密度要合适,体积不易太多,包括冻存管的质量也要进行确认,避免复苏时冻存管炸裂。现在大部实验室使用冻存盒进行细胞冻存,要注意及时将冻存盒里的细胞转移到液氮罐中。

       以上是,Sophion在细胞培养方面的一些小技巧,更详细的内容,例如传代细胞密度等,大家可以阅读下方的应用报告。针对一些特殊的稳转细胞的特殊处理培养方式,Sophion也做了大量的工作,有需要的小伙伴也可以通过官网或者发邮件获得相关的资料。

官方网站:https://sophion.com/
联系邮箱:yhu@sophion.com


更多Sophion全自动膜片钳系统信息,
Sophion官方网站:sophion.com
或者联系:yhu@sophion.com
                18916675057

标签:

参与评论

全部评论(0条)

获取验证码
我已经阅读并接受《医疗器械网服务协议》

推荐阅读

版权与免责声明

①本文由医疗器械网入驻的作者或注册的会员撰写并发布,观点仅代表作者本人,不代表医疗器械网立场。若内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们立即通知作者,并马上删除。

②凡本网注明"来源:医疗器械网"的所有作品,版权均属于医疗器械网,转载时须经本网同意,并请注明医疗器械网(www.120med.com)。

③本网转载并注明来源的作品,目的在于传递更多信息,并不代表本网赞同其观点或证实其内容的真实性,不承担此类作品侵权行为的直接责任及连带责任。其他媒体、网站或个人从本网转载时,必须保留本网注明的作品来源,并自负版权等法律责任。

④若本站内容侵犯到您的合法权益,请及时告诉,我们马上修改或删除。邮箱:hezou_yiqi

关于作者

作者简介:[详细]
最近更新:2023-09-18 16:20:36
关注 私信
更多

最新话题

最新文章

作者榜