SEC分析神器Biozen dSEC—蛋白or多肽or寡核苷酸都能做(文末有惊喜)
上回我们说到,Ti这种金属拥有很强的惰性,如果做成对应的色谱柱硬件,将非常适合于一些对金属离子敏感的化合物。(走在行业的前列——Ti与BioZen的故事)
今天我们将延续上次的故事,给大家聊一聊当您要做体积排阻色谱SEC的时候,Biozen这种钛合金的硬件,能为我们带来什么亮眼的好处呢?
“
首先,让我们情景再现一下:
进样叠加一蛋白质分析预充色谱柱比较
我们设计了全新的BioTi生物兼容硬件,帮助您节省花费在色谱柱预充上的漫长时间。
——Jason Anspach博士
资深科学家
对相同填料,不同柱管硬件的两根色谱柱进行比较,我们可以发现,传统不锈钢硬件的色谱柱会对蛋白(特别是等电点相对偏低的蛋白)产生一定的吸附作用,需要多次进样来预饱和色谱柱。而使用BioTi硬件的色谱柱,可以大大降低样品和色谱柱硬件之间的相互作用,迅速达到饱和点。
那么对于常见的PEEK生物相容性硬件来说,钛合金硬件有什么优势呢?BioTi的真正价值并不在于压力,而是与内径差异有关。实验室测试了一批色谱柱之后发现,BioTi内衬的色谱柱内径RSD值基本跟传统不锈钢管柱相当,但明显优于PEEK内衬的色谱柱内径的RSD值。这表明了什么呢?我们都知道内径为4.4mm的色谱柱与内径为4.6mm的色谱柱相比,当以相同的流速运行时,其线速度会有所不同,这可能就会导致保留时间的变化。
不锈钢 | BioTi | PEEK | |
平均值 | 4.58 | 4.58 | 4.56 |
4.58 | 4.58 | 4.44 | |
4.58 | 4.58 | 4.62 | |
4.58 | 4.58 | 4.64 | |
4.58 | 4.58 | 4.56 | |
4.56 | 4.6 | 4.6 | |
4.58 | 4.62 | 4.64 | |
4.58 | 4.58 | 4.6 | |
4.58 | 4.58 | 4.68 | |
4.58 | 4.6 | 4.62 | |
4.58 | 4.6 | 4.58 | |
4.56 | 4.6 | 4.62 | |
4.58 | 4.59 | 4.60 | |
% RSD | 0.17% | 0.29% | 1.31% |
保留时间 % RSD | 0.34% | 0.59% | 2.60% |
除了BioTi硬件,Biozen dSEC还有另外两个技术加持。第一,借助高惰性热改性技术,使硅胶达到更低的孔隙体积,实现更好的稳定性和重现性。第二,采用了独有的亲水性二醇类键合表面,能够防止硅胶表面与蛋白质样品之间产生次级相互作用。
上述三种技能叠Buff,塑造了Biozen dSEC优异的性能。除了做单双抗时候优异的分离,在做ADC这类偶联了payload的化合物时,也表现出独特的优势。下图为Anti-HER2 mcMMAF在Biozen dSEC-2上做的分子大小变异体,可以看到就算不加有机溶剂,也依然可以得到比较良好的峰形。
当然,随着多肽和寡核苷酸药物的兴起,对于这两种新分子的质控要求也越来越完善,其中也有Biozen dSEC-2发挥作用的地方。
在CDE发布的《化学合成多肽药物药学研究技术指导原则(试行)》中,对于多肽的聚合物有明确的控制要求。
类别 | 描述 | 来源 |
聚合物 | 端基具有反应活性或为二硫键改变等引发肽聚合 | 合成或降解 |
选自表格 肽相关杂质的类别及来源
替尔泊肽聚合物分析液相色谱图
虽然我国目前并没有针对寡核苷酸药物的法规及指导原则,但是从FDA发布的源于寡核苷酸药物的CMC指南草案中可以看到,对于双链的寡核苷酸,需要使用两个正交的方法来评估单链和双链的纯度,以确定退火的完整性。
siRNA聚合物,双链,单链分析液相色谱图
哇,这么看来,Biozen dSEC-2适合的应用场景有很多啊,不过对于更大的生物分子,比如腺相关病毒AAV,那就得用我们的新产品Biozen dSEC-7啦~我们下期再见!
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