看似简单的话题：层析柱如何正确保存？-医疗器械网

看似简单的话题：层析柱如何正确保存？

来源：Cytiva（思拓凡）分类：促销 2024-05-13 09:30:09 18阅读次数

层析柱的保存说来很简单，一般使用20%乙醇作为保存液，配基为蛋白的亲和填料比如MabSelect PrismA会推荐低温（2-8摄氏度）保存，而常规的离子交换或者疏水层析填料4-30摄氏度。大家按照说明书推荐条件操作即可（注意阅读说明书哦~）。但是实际使用的时候，特别是生产阶段的柱子，会发现保存仍然是容易出问题的环节。所以我们“简单”聊一聊层析柱如何保存？

层析柱的保存液一般会有哪些推荐呢？

20%乙醇是层析柱最为常见的保存溶液，但是因为车间的防爆考量，或者某些时候大家从使用的方便性角度来考虑，希望能换一种其他类型的保存液，备选方案有2%苯甲醇或者10mM NaOH。那么，可能有人会问，NaOH浓度能否再高一些呢？从实际使用案例，也有一些使用者直接使用0.1-0.5M NaOH来进行保存。理论上，NaOH浓度越高，对填料本身的影响也会越大。不管我们使用的是何种保存液，对于每根柱子而言，柱子本身保存前的污染程度，车间环境等均不同，大家仍然需要针对自己使用的柱子进行保存条件的研究和验证。

层析柱保存一般是建议柱上保存还是柱下保存呢？

对于一根密封性良好的柱子而言，柱上保存和柱下保存均可，各有优劣势，也各有使用案例。

如果进行柱上保存，可以避免反复的拆柱和装柱，中途更换保存液或者定期SIP处理直接连接?KTA层析系统即可，比较方便。但是前提是，我们需要使用密封性有保障的层析柱，若层析柱密封性发生问题，那么长期保存过程中，保存液会发生挥发，导致填料干掉，甚至引起污染。

如果进行柱下保存，也就是将填料从柱子中拆下来，保存在桶内，我们可以加足量的保存液，一般很少发生干掉的问题，但是如果需要定期进行SIP或者保存液更换或者需要进行生产，那我们需要进行装柱后进行使用。除此之外，我们还需要考虑车间的设计和操作的便利性，比如如果填料需要在冷库存放，但是层析柱很大不容易移动，那柱下冷库保存或者短期内在室温进行柱上保存可能是比较可行的方案。所以我们需要根据自己的实际条件合理选择保存方式，在最大化的保证保存效果的前提下，尽量增加操作的便利性。

保存液在长期保存过程中是否需要定期更换？一般多久更换一次？是否需要定期进行SIP？

每个柱子均处于不同的环境中，我们需要自己来研究定期更换保存液或者SIP的频率。那么如果确定这个频率呢？比较合理的是，我们首先需要有一个好的层析柱监控方案。对于一个完成有效清洁的层析柱而言，保存的功能主要就是控制微生物污染，所以判断保存状态是否正常的两个重要指标就是微生物和内毒素。在制定最终的频率之前，我们可以定期监控微生物和内毒素随保存时间的变化趋势，同时还可以结合目视观察层析柱状态等来监控柱子是否良好。如果见到微生物和内毒素有升高的趋势，就需要及时进行SIP，去除污染，重新保存。若层析柱可以在长期内处于好的状态，谨慎而言，我们可以按照每1-3个月来作为初步方案的更新频率。

层析柱在保存期间，什么情况下会容易发生保存不当，引起污染或者层析柱干掉？

想要达到一个良好的保存效果和很多方面有关。

层析柱的清洁至关重要。在保存之前，我们需要开发一个有效的CIP程序，确保填料每次使用后、保存前可以处于一个干净的状态，这样我们就有了一个好的保存的起点。而填料的清洁最有效的方案是NaOH，所以耐碱性对于层析填料而言是一个影响层析填料使用寿命的重要性质。假设CIP不足的情况下，填料本身吸附的杂质中包含了大量的有机物，甚至在保存前已经发生了污染，那么保存效果肯定会大大下降；吸附的杂质中可能包含某些具有酶活性的HCP，可能会降解填料的蛋白类配基，从而导致长期保存后填料的载量发生急剧衰减（? 清洁的艺术：亲和填料的清洁与寿命）。

层析柱的保存环境。层析填料所处的环境影响着保存效果，环境包括层析柱内，保存液的成分、浓度、pH等，还包括外部的环境，如温度、湿度、洁净度。在层析柱保存之前我们一般进行了CIP程序，比如使用1M NaOH清洗了柱子，然后使用水或者缓冲液将CIP试剂及溶解下来的杂质冲洗干净，但是pH是容易被大家忽略的一个参数，特别对于亲和填料（如protein A亲和），如果在CIP后，pH无法冲洗回到中性，此时直接使用保存液保存，则会使得层析柱长期在高pH状态下，对填料损伤是比较大的。对于一般的GMP车间，车间环境的温度、湿度均是控制在比较稳定的范围，但是我们仍然需要注意意外情况的发生，做好环境的监控非常重要。

层析柱的密封性。针对柱上保存的情况，柱子的密封性是非常重要的。所以选择一个质量好的层析柱，做好密封性测试是必要的。对于长期使用的柱子，我们需要关注密封性的老化，及时更换容易随着时间而发生损耗的配件。

其他考虑。做好我们认为的“万全准备”，“意外”仍然不可避免。很多情况下，我们自认为都按照说明书进行了操作，也吸取了很多生产经验，但是仍会发生保存不当的事件。那是因为真实的情况比理论更加复杂，而所进行的研究又不足够的充分，所以不可避免的会遗漏或者忽略掉某些方面。所以做好监控方案，及时发现问题、解决问题，不断优化保存方案是必经之路。

从法规要求方面，有哪些对层析柱保存的要求呢？

在《药品GMP指南》第2版中提到，“层析介质在位或者离线保存时，需选择合适的保存液，周期性检查保存液情况，定期更换保存液，避免液位下降与微生物滋生”。从一封FDA Product Review Letter中提到，“Purification can take up to XX days. Many of the questions in our second information request relate to concerns that all of the many holding times and conditions for various process intermediates need to be validated adequately.”在很多大家熟知的行业指南（如PDA）或者资料中，也均有提及层析柱的保存方面。所以不管是法规监管方面，还是从企业自身潜在面临的损失而言，层析柱的保存均是不可忽视的。需要使用者针对每个柱子的保存过程进行系统的风险评估、保存条件的不断优化和确认、并在实际生产中严密监控、提前做好预防和处理措施。（? 过氧乙酸（PAA）在抗体亲和填料MabSelect PrismA上的消毒研究）

如果大家仍然遇到了层析柱保存的问题，欢迎联系我们一起分析探讨。

最后附上两篇关于层析填料保存的延伸文章供需要制定保存方案的伙伴们参考：

1. CY13376-12May20-AN ：Use of benzyl alcohol as a shipping and storage solution for chromatography media

2. CY13951-29May20-AN ：Use of sodium hydroxide for cleaning and sanitization of chromatography resins and systems

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